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应 如何选择优化的包被条件?

点击次数:118   发布时间:2019/8/22 15:23:15

 如何选择优化的包被条件?
 
1.包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。 天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被,对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被(先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上,再通过特 异性反应使抗原固相化)。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物,由于分子量太小,往往难于直接吸附在酶标板 上,一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联,偶联物吸附于固相载体上。
 
 
2.包被温度的选择通常是4-8度条件下过夜或者37度保温2小时,我们强烈建议4-8度条件下包被,有利于蛋白活性的保持。


3.包被液的选择一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液,如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话,也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。
 
 
4. 包被浓度的选择包被的适浓度随固相载体和包被物的性质变化,一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml,要明确针对特定包被抗原的适包被浓度需要通过实验来确定。包板后需要封闭吗?应该选择什么样的封闭体系?封闭是否必要,取决于ELISA的模式及具体的实验条件。一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物 是高活性的,操作时洗涤彻底,不经封闭也可得到满意的结果。而在间接法测定中,封闭一般是必不可少的。常用的封闭剂有0.05%-0.5%的BSA、 10%的小牛血清、1%明胶、5%的脱脂奶粉,AbMART推荐使用5%脱脂奶粉,价廉而且封闭能力强,不过5%脱脂奶粉只适合短期内使用,不宜长期保 存,所以elisa试剂盒中较少使用。

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