服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 货号 | 规格 |
转基因植物Cry1A(c)基因检测试剂盒(荧光-PCR法)规格 | GOY-01P64529 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
伯氏致病杆菌软骨蛋白39抗体Anti-MMUT Antibody列腺转谷氨酰酶(TGM4)ELISA试剂盒
枯草芽孢杆菌肝癌相关蛋白2抗体(转录因子YY1结合蛋白1抗体)Anti-MOG Antibody列腺抑制肽(PIP)ELISA试剂盒
澳大利亚平脐蠕孢核酸敏感元件结合蛋白1Anti-MORC3 Antibody列腺酸性磷酸酶(ACP3)ELISA试剂盒
丛赤壳y-盒结合蛋白1抗体Anti-Motilin(MLN) Antibody列腺素还原酶2(PTGR2)ELISA试剂盒
大肠埃希氏杆菌原癌基因Yes相关蛋白1抗体Anti-MNAT1 Antibody列腺素还原酶1(PTGR1)ELISA试剂盒
酿酒酵母磷酸化DNA结合蛋白B抗体Anti-MNT Antibody列腺素I合酶(PTGIS)ELISA试剂盒
小单孢菌磷酸化原癌基因Yes相关蛋白1抗体Anti-MPG Antibody列腺素F受体(FP)ELISA试剂盒
Prauserella核转录调节因子YY1抗体Anti-MPO Antibody列腺素E受体3(EP3)ELISA试剂盒
蜡状芽孢杆菌磷酸化原癌基因Yes相关蛋白1抗体Anti-MPI Antibody列腺素E受体2(EP2)ELISA试剂盒
贝伦格葡座腔菌梨生化型原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗体Anti-MPO Antibody列腺素E合酶2(PTGES2)ELISA试剂盒
少根根霉磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗体Anti-MPO Antibody(PB0072)列腺素E合酶(PTGES)ELISA试剂盒
钦海特德沃斯氏菌磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗体Anti-MPZ Antibody列腺素D合酶(PTGDS)ELISA试剂盒
谷氨酸棒杆菌磷酸化zeta相关蛋白70抗体Anti-MPP2 Antibody列腺素D2合成酶(PGD2S)ELISA试剂盒
包围漆斑菌磷酸化zeta相关蛋白70抗体Anti-MRC1 Antibody列腺六跨膜表皮抗原2(STEAP2)ELISA试剂盒
巨大球菌属磷酸化斑联蛋白抗体Anti-MR1 Antibody列腺干抗原(PSCA)ELISA试剂盒
康氏假单胞菌锌指蛋白924抗体Anti-MPP1 Antibody列腺凋亡应答因子4(PAR4)ELISA试剂盒
剪接因子,精氨酸/丝氨酸丰富19Sphingomonasoligoaromativorans人卵巢癌组织源细胞
转录因子SOX-11蛋白抗体Sphingomonasmolluscorum人胆道癌组织源细胞
单羧酸转运蛋白3/4抗体Acinetobacterradioresistens人肾癌组织源细胞
轴突生长因子CD108抗体脑膜脓毒性金黄杆菌人膀胱癌组织源细胞
转基因植物Cry1A(c)基因检测试剂盒(荧光-PCR法)规格坚牢绿FCF;固绿;快绿;坚牢绿;食用色素绿色3号;食品绿3
Fast green FCF
其他 Food green 3;C.I. 42053
产品规格: 高纯,90%
包装:5克/25克
CAS号:2353-45-9
别:High Purity Grade
有效分光含量:≥90.0%
干燥失重:≤8.0%
Em (622nm, 50% Methanol):>125000
性状:深绿色粉末或栗色带金属光泽的颗粒。有吸湿性。易溶于水,溶于乙醇,溶于浓硫酸呈暗橙色,稀释后呈暗绿色,溶于浓盐酸或浓呈橙色,溶于10%氢氧化钠溶液呈亮蓝色。熔点 290℃(分解)。大吸收波长 628nm。半数致死量(大鼠,经口)>2G/kG
用途:生化研究。植物组织学和细胞学的染色。是一种碱性染料,用于IEF、PAGE 和 SDS-PAGE中的蛋白质染色。快绿染色比亮蓝R(Brilliant Blue R )覆盖更宽范围的蛋白质浓度,是线性的。 电泳过后,把蛋白质固定在胶上染色更加灵敏,在胶上用0.1%快绿溶于30% (v/v) 乙醇、10% (v/v) 醋酸或7% 醋酸染色2小时再用30% (v/v) 乙醇、10% (v/v) 乙酸或 7% 醋酸去染色. 染色胶能在 625 nm浏览。检测灵敏度要比亮蓝R(Brilliant Blue R)高30%。另外,快绿还用于亚硫酸盐测定,制造细菌培养基,用以鉴别及其他乳糖发酵菌,培养分离粪便中的伤寒杆菌
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。