服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 货号 | 规格 |
转基因玉米品系Bt11检测试剂盒(PCR-荧光探针法)价格 | GOY-01P64164 | 48T 0.1PCR管 |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
相思根瘤菌生长因子受体结合蛋白14抗体Human TSPAN11 ELISA Kit大鼠色素P4502E1(CYP2E1)免疫试剂盒
大肠埃希氏菌HBeAg结合蛋白4/甘油激酶抗体Human TSPAN10 ELISA Kit大鼠色素P450,家族7亚科A多肽1(CYP7A1)免疫试剂盒
葡座腔菌甘酸-N-酰基转移酶样2抗体Human TSPAN2 ELISA Kit大鼠色素P450(CYP450)免疫试剂盒
灵芝磷脂酰基蛋白聚糖2抗体Human SLC26A4(Pendrin) ELISA Kit大鼠色素P450 3A4(CYP3A4)免疫试剂盒
根瘤菌氧化还原酶GlyR1/核蛋白60抗体Human TSPAN3 ELISA Kit大鼠色素P450 1A1(CYP1A1)免疫试剂盒
戊糖乳杆菌神经鞘脂激活蛋白3抗体Human PPARGC1A(Peroxisome prolifeRator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha) ELISA Kit大鼠色素C氧化酶(COX)免疫试剂盒
假单孢菌甘露糖脱水酶GMDS抗体Human TRPV5 ELISA Kit大鼠色素C(Cyt-C)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌糖皮质激素调节元件结合蛋白1抗体Human TRPV4 ELISA Kit大鼠色素b5 免疫试剂盒
耐久肠球菌糖皮质激素调节元件结合蛋白2抗体Human TSGA13 ELISA Kit大鼠膜钙转运ATP酶1(ATP2B1)免疫试剂盒
古巴栓孔菌胶浆成熟因子γ/GMF-γ抗体Human TRPS1 ELISA Kit大鼠角蛋白18-M65(CK 18-M65)免疫试剂盒
粉紫香蘑谷氨酰转移酶GMPS抗体Human TRPT1 ELISA Kit大鼠角蛋白18-M30(CK 18-M30)免疫试剂盒
平滑正青霉GDP甘露糖焦磷酸化酶B抗体Human TSHZ3 ELISA Kit大鼠间粘附分子3(ICAM-3)免疫试剂盒
新疆盐地杆菌G蛋白偶联胆汁酸受体1Human TRPV4 ELISA Kit大鼠间粘附分子2(ICAM-2)免疫试剂盒
酿酒酵母葡糖6-磷酸脱氨酶1抗体Human TRPV5 ELISA Kit大鼠间粘附分子1(ICAM-1)免疫试剂盒
硫磺菌葡糖6-磷酸脱氨酶2抗体Human TRUB2 ELISA Kit大鼠分裂周期基因(CDC)免疫试剂盒
传染性支气管炎病葡糖6-N-乙酰基转移酶1抗体Human TRPV6 ELISA Kit大鼠性T淋巴相关抗原4(CTLA-4/CD152)免疫试剂盒
刺孢小克银汉霉原变种Cunninghamella│echinulata var. echinulata 质量规格:beads,4-8 mesh(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃
病毒Influenzavirus A│Avian influenza virus 质量规格:beads,8-12 mesh化木兰花碱
Aspergillus│niger 质量规格:20-40目,气相、液相色谱柱盐酸黄柏碱
转基因玉米品系Bt11检测试剂盒(PCR-荧光探针法)价格麦芽糖糊精;糊精10;糊精15;糊精20
Maltodextrin
其他 Dextrin from maize starch
产品规格: BR
包装:500克
CAS号:9050-36-6
别:BR
葡糖当量:11~14%
PH(50%):4.5~5.5
性状:粉末。无臭。无味。溶于水。淀粉经酸或酶水解而产生的葡糖值在5~20的低转化产物。结构松散。密度低。流动性好。吸附性强。无味或微带甜味。为α-1,4糖苷键组成的麦芽低聚糖和低分子糊精
用途:生化研究。
保存:RT
操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。