操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
产品名称 | 货号 | 规格 |
牛病毒性腹泻病毒检测试剂盒(荧光PCR法)品牌 | GOY-01P64054 | 50T |
储存条件:
产品仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
实时荧光定量PCR:
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的:
1)Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期(对数期),此时微小误差尚未放大,因此Ct值的重现性好,即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系,可利用标准曲线对未知样品进行定量测定,因此,实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄为止定量准确,重现性好的定量方法,已得到全的公认,广泛用于基因表达研究、转基因研究,药物疗效考核、病原体检测等诸多域。
定量PCR方法:
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗di高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。
香菇死亡相关蛋白6/Fas死亡区相关蛋白抗体Human LARP7(La-related protein 7) ELISA Kit人单核趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)免疫试剂盒
木生炭角菌酶动力蛋白2抗体Human DDX42(ATP-dependent RNA helicase DDX42) ELISA Kit人单核趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫试剂盒
冷海水黄杆菌防御素β2/Defensin β2抗体Human COL10A1(Collagen alpha-1(X) chain) ELISA Kit人单纯疱疹病抗原-1(HSV-Ag1)免疫试剂盒
杏鲍菇多巴受体相互作用蛋白5抗体Human SORD(Sorbitol dehydrogenase) ELISA Kit人单纯疱疹病Ⅱ型抗体IgM(HSVⅡ-Ab)免疫试剂盒
乳酒假丝酵母性发育转录因子蛋白DMO抗体Human ZEB1(Zinc finger E-box-binding homeobox 1) ELISA Kit人单纯疱疹病Ⅱ型抗体IgG(HSVⅡ-Ab)免疫试剂盒
侧耳无胸腺症关键蛋白6样抗体(迪格奥尔格综合征)Human DTNBP1(Dysbindin) ELISA Kit人单纯疱疹病Ⅰ型(HSVⅠ)抗体(IgM)免疫试剂盒
蜡蚧菌轴丝动力蛋白10抗体Human MTOR(Serine/threonine-protein kinase mTOR) ELISA Kit人单纯疱疹病Ⅰ型(HSVⅠ)抗体(IgG)免疫试剂盒
酿酒酵母D型天冬氨酸抗体Human ZEB2(Zinc finger E-box-binding homeobox 2) ELISA Kit人单纯疱疹病Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗体(IgM)免疫试剂盒
绣球菌*DYDC1蛋白抗体Human OTC(Ornithine carbamoyltransferase, mitochondrial) ELISA Kit人单纯疱疹病Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗体(IgG)免疫试剂盒
根瘤菌属二氢嘧啶抗体Human CA3(Carbonic anhydrase 3) ELISA Kit人单氧化酶(MAO)免疫试剂盒
黑腐皮壳脱磷酸辅酶A结构域蛋白抗体Human ISG15(Ubiquitin-like protein ISG15) ELISA Kit人带3蛋白(Band3)免疫试剂盒
枯草芽孢杆菌DCST1蛋白抗体Human AMFR(E3 ubiquitin-protein ligase AMFR) ELISA Kit人大疱性类天疱疮抗体(BP)免疫试剂盒
DCUN1D4蛋白抗体Human DDX42(ATP-dependent RNA helicase DDX42) ELISA Kit人大内皮素(Big ET-1)免疫试剂盒
土生类诺卡氏菌脱氧辅合酶蛋白抗体Human OCLN(Occludin) ELISA Kit人大肠癌一抗原4(CCSA-4)免疫试剂盒
链霉菌短链脱氢酶/还原酶家族4样2蛋白抗体Human LARP7(La-related protein 7) ELISA Kit人大肠癌一抗原3(CCSA-3)免疫试剂盒
无花果曲霉DDRGK1蛋白抗体Human COL10A1(Collagen alpha-1(X) chain) ELISA Kit人大肠癌一抗原2(CCSA-2)免疫试剂盒
副溶血弧菌Vibrio│parahaemolyticus 质量规格:分析标准品,用于食品分析醋酸棉酚
幽门螺杆菌Helicobacter│pylori 质量规格:分析标准品,>99%(GC)柚皮苷二氢查尔酮
灰平链霉菌Streptomyces│griseoplanus Backus et al. 质量规格:分析标准品山姜素
牛病毒性腹泻病毒检测试剂盒(荧光PCR法)品牌疱肉牛肉粒
Dried Meat Particle
产品规格: BR
包装:100克