蛋白质(protein)是生命的物质基础,是有机大分子,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%,即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内蛋白质的种类很多,性质、功能各异,但都是由20种氨基酸(Amino acid)按不同比例组合而成的,并在体内不断进行代谢与更新。
蛋白质是一种复杂的有机化合物,旧称“朊(ruǎn)”。氨基酸是组成蛋白质的基本单位,氨基酸通过脱水缩合连成肽链。蛋白质是由一条或多条多肽链组成的生物大分子,每一条多肽链有二十至数百个氨基酸残基(-R)不等;各种氨基酸残基按一定的顺序排列。蛋白质的氨基酸序列是由对应基因所编码。除了遗传密码所编码的20种基本氨基酸,在蛋白质中,某些氨基酸残基还可以被翻译后修饰而发生化学结构的变化,从而对蛋白质进行激活或调控。多个蛋白质可以一起,往往是通过结合在一起形成稳定的蛋白质复合物,折叠或螺旋构成一定的空间结构,从而发挥某一特定功能。合成多肽的细胞器是细胞质中糙面型内质网上的核糖体。蛋白质的不同在于其氨基酸的种类、数目、排列顺序和肽链空间结构的不同。
在蛋白质的研究过程中,我们往往需要追踪蛋白在细胞内如何移动,或纯化改造后的蛋白。这时,标签(tag)是一种好东西,有助于目标蛋白的检测和纯化。尽管目前已有不少标签,但适用于植物细胞的理想标签并不多。
GFP、GUS和HaloTag等蛋白标签作为报告蛋白非常有用,可以检测蛋白质的定位或表达水平。不过,它们比较大,有时会影响目标蛋白的特性。FLAG和HA等肽段标签也常用于植物细胞,但它们有时会表现出低特异性、低亲和力或难以实现蛋白洗脱。
日本筑波大学Kenji Miura教授领导的研究团队近日在《Frontiers in Plant Science》上介绍了一种新的标签系统,能够检测和纯化植物细胞中的蛋白质。这种方法采用了RAP标签来标记蛋白质,随后利用PMab-2抗体来识别标签和纯化蛋白。
为了解决这个问题,Miura教授及其同事想看看他们是否能在模式植物本氏烟(Nicotiana benthamiana)中生产PMab-2抗体。他们不仅成功产生了PMab-2,并且证明植物产生的PMab-2在行为上与CHO细胞产生的抗体相似。通过这种方式,他们降低了抗体的生产成本。
之后,研究人员测试了RAP标签/ PMab-2亲和纯化方法的可行性。他们在植物细胞中表达了带有RAP标签(DMVNPGLEDRIE)的蛋白质,之后发现利用PMab-2抗体能够特异性地识别这些带有标签的蛋白。