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流式分析细胞具体步骤

阅读次数：729 发布时间：2020/3/4 16:10:21

流式分析细胞具体步骤：
1 细胞培养：取对数生长期的细胞，按1X106/mL以1mL体积接种24孔板或2mL体积接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），在特定的时间后终止培养，进行下一步的实验。（个人体会：细胞的浓度根据自己实验的要求，但根据经验总细胞数在1X106以上，如果细胞太少，接下来的漂洗和固定还会损失的，这样上机时有时会出现细胞不够） 2 细胞固定：离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，加入预冷70％乙醇，于4℃固定过夜，或-20℃长期固定。（4℃过夜一般隔天就进行检测，如果想推迟几天测，那就保存在-20℃，有资料说-20℃可以保存一个月，个人建议尽量在*短时间内检测，有些实验是在不同时间点上收细胞，这时我就等*后一次固定完了一块测，基本上也多在一周内检测完毕，没有特地去比较保存时间对检测结果的影响） 3 细胞染色：离心收集细胞，以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS含50ug/mL溴化乙锭（PI），100ug/mL RNase A, 0.2% Triton X-100, 4℃避光孵育30分钟。（PI我是直接用PBS配成工作浓度，然后加入细胞沉淀混匀，RNA酶现加，但有时不加发现对实验结果也没太大的影响） 4 流式分析：以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2-3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
A. 正常培养条件下的细胞周期；B. 细胞因子饥饿法将细胞同步在G0/G1其；C. 显示G0/G1期前的亚二倍体，代表细胞凋亡。

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